Що слід враховувати при виборі правильного мікроскопа для системи візуалізації живих клітин

Для успішного проведення експериментів із зображенням живих клітин критично важливо використовувати правильний підхід. Вибираючи відповідний мікроскоп для візуалізації живих клітин, слід враховувати такі аспекти: життєздатність зразка, швидкість отримання зображення (тимчасова роздільна здатність) і необхідну роздільну здатність у всіх трьох вимірах.

During live cell imaging, certain environmental conditions must be maintained to avoid detrimental physiological changes. In order to capture physiologically relevant cellular dynamics, live cell experiments require specific environmental conditions, including temperature, pH (via CO2), and humidity control. Furthermore, some experiments may even require hypoxic conditions. Modern incubation systems not only tightly control environmental conditions, they can also provide detailed data reports and alert users to temperature, gas, or humidity variations during the course of an imaging experiment. To minimize or avoid the effects of photodamage, getting the right balance between sensitive detection, accurate label separation (if using >1 етикетка), і найменша доза світла для збудження має вирішальне значення.

Для експериментів із живими клітинами висока швидкість отримання часто є критичною, зокрема для вивчення швидких динамічних процесів, таких як спостереження за везикулами. Використання оптичних фільтрів призводить до обмеження швидкості через необхідність послідовного зображення під час зміни наборів фільтрів для кожного кольору, що використовується для вивчення взаємодії кількох компонентів. Послідовний збір зображень вимагає більше часу, ніж одночасний збір зображень, і, як наслідок, під час отримання можна пропустити швидкі рухи зразка, оскільки кожен колір має довший часовий інтервал від одного зображення до іншого. Крім того, коли важливе пряме порівняння між двома або більше кольорами, сигнали могли змінюватися навіть між окремими отриманнями флуорофорами, ускладнюючи інтерпретацію даних.

Для отримання тривимірних зображень у часі доступно кілька технологій. Вибір системи залежить від вашого експерименту та від того, чи є вашим пріоритетом вища швидкість або менше освітлення зразка під час візуалізації під час отримання бажаної роздільної здатності 3D. Вибір найбільш відповідної системи традиційно вимагав від вас зробити вибір між камерою або конфокальною системою візуалізації живих клітин, однак сучасні рішення можуть забезпечити обидва способи комплексним способом.